远慕生物简述:ELISA的配置与设备?
技术原理及自备设备:
ELISA技术原理是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
自备设备有,蒸馏水,加样器,振荡器及磁力搅拌器,酶标仪,量筒,烧杯,吸水纸,坐标纸,温育箱,洗瓶,一次性试剂管,微移液及其吸嘴等。
试剂盒组成及试剂配制:
1.酶联板:一块(96孔)。
2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1,600pg/ml,将其稀释为400pg/ml后,再做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别稀释成400pg/ml,200pg/ml,100pg/ml,50pg/ml,25pg/ml,12.5pg/ml,6.25pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml,临用前15分钟内配制。如配制200pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)400pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3.样品稀释液:1×20ml。
4.检测稀释液A:1×10ml。
5.检测稀释液B:1×10ml。
6.检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8.底物溶液:1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液:1×10ml/瓶(2NH2SO4)。
11.覆膜:5张。
12.使用说明书:1份。
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