质粒中量提取试剂盒，Plasmid Midi Kit(25)使用说明书
上海远慕生物专业供应美国Omega旗下产品：DNA、RNA回收纯化相关溶液，基因组DNA相关溶液，RNA相关溶液，质粒相关溶液，酸洗玻璃珠，破壁酶Lyticase，植物组织直接PCR试剂盒，动物组织直接PCR试剂盒，石蜡组织（FFPE）直接PCR试剂盒，磁珠mRNA组织直接抽提试剂盒，质粒大量提取试剂盒，其他系列等，本司代理多款进口品牌及国产品牌供您选择，产品包含：ELISA试剂盒，MK体育直播高清版最新版 ，质粒载体，标准品对照品，培养基，抗体，化学试剂，生化试剂，MK体育app竞技 ，实验耗材，其他实验试剂等，品种齐全，型号广，价格实惠，咨询订购！
名称：质粒中量提取试剂盒
品牌：Omega
供应商：上海远慕
英文名/型号：Plasmid Midi Kit(2)
英文名/型号：Plasmid Midi Kit(10)
英文名/型号：Plasmid Midi Kit(25)
英文名/型号：Plasmid Midi Kit(100)
用途：从15-50ml细菌培养液中纯化200-250ug高纯度的质粒DNA
Plasmid Midi Kit(25)特性与优点：
无内毒素－内毒素含量低于0.1EU/µg
方便－菌裂解液中去除杂质无需离心操作
安全－无酚lvfang抽提
可靠－操作简单
Plasmid Midi Kit(25)操作步骤：
提示：将RNase A全部加入溶液P1中，混匀，使用后置于2-8℃保存。
1.取过夜培养菌40-60ml（zui大不超过90 ml）菌液，装入50ml离心管中，4,500~6,000 x g于4℃离心5 min沉淀菌体（也可12,000 x g离心2分钟），*弃除上清。
2.加入2.5 ml 溶液P1，充分混悬震荡菌体沉淀，使其*分散开，至无絮块存在。室温放置3~5 min。 如果有未*混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3.加入2.5 ml 溶液P2，轻轻颠倒离心管6~8次，室温放置5 min，使细菌*裂解，溶液透明。 温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要准确的5分钟。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不*，应减少菌体量。
4.加2.5 ml溶液PⅢ，立即颠倒离心管6~8次，充分混匀，至白色絮状物产生。上述裂解液于4℃ 12,000~16,000 x g离心10~15 min，小心吸出上清，移入新的50 ml离心管中。 加入溶液PⅢ后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。 注意： 使用异丙醇沉淀，蛋白杂质和盐离子共沉淀较少，可能看不到明显的较大团块沉淀，但是质粒还是可以*沉淀下来，不影响实际的质粒产量。如果你习惯看见较大的沉淀团块操作，可以选择2倍体积的无水乙醇沉淀。
5.加入5 ml 异丙醇，颠倒离心管，充分混匀。
6.于4℃ 12,000~16,000 x g离心10 min，小心弃去上清，倒置于吸水纸上轻轻沥干残余液体，加入3-5ml 70%乙醇漂洗一遍，zui高速离心5分钟，弃上清，晾干沉淀。 DNA沉淀如果干燥过头，DNA将无法*溶解，但是如果乙醇没有晾干挥发干净，残留太多，也会造成DNA无法*溶解。 注意：异丙醇离心沉淀后，质粒纯度很高吸附在管底和侧壁可能看不见沉淀，但是不影响产量，后续步骤仔细吹打管底和沉淀所在的侧壁涮洗溶解质粒。
7.加入0.7 ml 溶液P1*溶解沉淀团块，注意附着在管底和侧壁上的质粒沉淀虽然可能看不见，也要吹打管底和沉淀所在的侧壁涮洗下来（大质粒可用宽口吸管轻轻吹打辅助溶解）。然后将质粒溶液转入1个新的1.5 ml离心管中。 可选步骤（一般不需要）：如果菌株RNA丰富有微量RNA残留，可在此步骤后将质粒溶液 60℃孵育15 min消化RNA。
8.加入55μl杂质清除液A，颠倒充分混匀后加入约0.1体积(约80μl)冰预冷的内毒素清除剂，颠倒旋转7-10次（30秒左右）充分混匀，冰浴或者冰上放置>=5分钟，中间偶尔颠倒混匀几次。 内毒素清除剂加入上清后，上清会变得浑浊，但是冰浴后应恢复清亮。 注意：如果不需要去内毒素用于转染，可在此步骤只加入55μl杂质清除液A，充分混匀后冰上放置5分钟，离心后小心取上清转入一个新管，直接接步骤11。
9.42℃水浴，溶液又会变为浑浊，颠倒混匀后42℃温育5分钟。
10.室温14,000 x g离心5 min分相（温度低时，内毒素清除剂无法分相，因此必须 至少20℃以上室温离心或者保证冬季转头温度20℃以上）。上层水相含DNA，下层蓝色油状相含内毒素和其它杂质。将含DNA的上层水相转移到新管（注意不要吸到蓝色油状层，里面含内毒素等杂质），弃油状层。溶液必须分为上下两相，否则应重复步骤9-10。
11.将上一步所得上层水相中加入等体积杂质清除液B（约750μl），轻柔混匀，4℃ 14,000 x g离心10 min，弃上清（注意不要丢失DNA），轻轻加入1 ml 70%乙醇洗涤，离心弃上清，共两次，室温倒置晾干5~10 min使乙醇*挥发。
12.加适量TE或者纯水（50~100μl）溶解沉淀（可在37℃水浴中振荡以辅助溶解）。 要注意很多质粒DNA可能附着在离心管侧壁上，即使看不见，也应该充分吹打侧壁溶解回收质粒DNA。 zui后沉淀可以根据需要选择任意小体积溶解，这样可以得到很高浓度的转染级质粒DNA（高达5-10μg/μl）。如果有需要，客户也可以选择更大体积溶解。
温馨提示：以上相关说明请以产品实际说明书为准！
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