质粒小量提取试剂盒I型，Plasmid Mini Kit I(200)说明书
上海远慕专业供应美国Omega品牌产品，部分系列有：质粒大量提取试剂盒，快速过滤超大量质粒提取试剂盒，宏量质粒提取试剂盒，质粒快速中量提取试剂盒，其他系列等，更多系列请！
名称：质粒小量提取试剂盒I型
品牌：Omega
供应商：上海远慕
型号：Plasmid Mini Kit I(200)
用途：从小于5ml培养过夜的细菌培养液中纯化约35ug质粒DNA
质粒小量提取试剂盒I型特性与优点：
安全－无酚lvfang等危险的有机物抽提
可靠－操作简单，每次都能获得理想的效果
快速－可在50分钟内完成一次抽提工作
1.在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37℃振荡培养12-16h。需特别指出的是：endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109。
2.取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min。
3.去上清，加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体*悬浮。
4.加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)。
5.加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀。
6.室温13000×g离心10min。
7.特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。室温10000×g离心1min，至裂解物*通过吸收柱。
8.弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度。 如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略。
9.弃滤过液，再用100%乙醇稀释的700µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min.注意：Wash Buffer浓缩液用前必须用纯乙醇稀释，方法见标签，如果经过冷冻，用前必须恢复室温。
10.此步可选：再加700µl Wash Buffer清洗吸收柱。
11.必须将吸收柱13000×g离心2min确保乙醇被去除，乙醇会影响下面的步骤。
12.将吸收柱放入干净1.5ml离心管，加30-50µl(取决于需要的终浓度)无菌去离子水或TE缓冲液在滤膜上，13000×g离心1min，一次可洗脱75-80%附着DNA（可进行再洗脱，但会降低DNA浓度）。
13.检测：方法A：分别在260nm和280nm波长下测定20-50倍稀释液的吸光度 DNA浓度＝260nm吸光度×50×稀释因子μg/ml 高质粒拷贝数能达到5ml培养液得到25μg DNA，如果260nm吸光度/280nm吸光度大于1.8，说明核酸大于90%。 方法B：和预知浓度DNA样品（Marker）一起做琼脂糖凝胶/嗅乙啶电泳，对比结果 （通常情况得到的DNA是单体超螺旋，也有少量多联体）
该试剂盒采用经典的碱裂解法和硅胶柱纯化方式，适合于从1.5-5.0ml培养过夜的大肠杆菌(DH5α, JM109)等菌液中抽提5-35µg高纯度的质粒DNA。操作者可在30分钟内完成多个样品的质粒提取工作。纯化的质粒可以直接用于自动测序、限制性内切酶酶切、PCR、标记等实验。从1.5-5.0ml培养过夜的菌液中收集细菌后，采用经典的碱裂解法裂解细菌，离心去除染色体DNA和蛋白质，上清液转移至硅胶柱，离心吸附质粒DNA，经两种溶液洗涤去除残余蛋白质和各种杂质，zui后用Elution Buffer洗脱出质粒DNA。
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